matlab检测细胞个数,细胞如何计数?
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细胞计数,看起来简单,其实暗藏玄机。今天就一起来学习下如何计数。
1.原理
计算细胞数目可用血球计数盘或是 Coultercounter 粒子计数器自动计数。
血球计数盘一般有二个 chambers,每个 chamber 中细刻 9 个 1 mm² 大正方形,其中 4 个角落之正方形再细刻 16 个小格,深度均为 0.1 mm。当 chamber 上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为 1 mm²×0.1 mm=0.0001 mL。使用时,计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以 10000,即为每 mL 中之细胞数目。
存活测试之步骤为 dyeexclusion,利用染料会渗入死细胞中而呈色,而活细胞因细胞膜完整,染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之 trypan blue 染料,如果细胞不易吸收 trypan blue,则用红色之 Erythrosin bluish。
计算细胞活率:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成,随时间延长,部分活细胞也开始摄取染料;因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力,用不含血清的稀释液,可以使染色计数更为准确。
2.材料
0.4% w/v trypan blue
Erythosin bluish stain
取 0.1 gram Erythrosin bluish 及 0.05 gram preservative methyl paraben 溶于 100 mL Ca++/Mg++ freesaline
血球计数盘及盖玻片
计数器
低倍倒立显微
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