ctab提取dna流程图_DNA提取（CTAB法）

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9)加入等体积氯仿/异戊醇，颠倒混合，以进一步抽提提取液中含有的蛋白质，并萃取出其中的酚(酚在水中有一定溶解度)；

10)12,000~13,000rpm离心10～15min，将上清转移到新管中，仍旧要注意不要触动中间的蛋白质层；

11)向上清中加入0.6倍至等体积异丙醇，彻底颠倒混匀，使DNA从溶液中析出，形成絮状沉淀；

12)用玻璃棒或枪头挑出DNA沉淀，放到已经加入70％酒精的1.5ml Eppendorf管中，颠倒管子几次，以洗涤DNA，溶解其中含有的色素等物质；

注：a 70％酒精如果为新配制的，则一定要将酒精和水彻底混匀，否则会使提取的DNA被溶解很多，必须注意！在其他实验中也是如此；

b 在这一步中，可以用70％酒精洗1～3次，每次5～15min，具体如何要根据提取的DNA 的情况决定，目的就是尽量洗掉DNA沉淀中的色素，尤其在提取叶片的DNA时容易有色素(叶绿素等)；

13)稍离心，倒出管中的酒精，并用枪将剩余的液体尽量吸净，真空浓缩仪干燥之后，向管中加入适量TE缓冲液溶解DNA；如果DNA溶解困难，可以用50～60℃水浴助溶；

注：此时得到DNA粗提产物；

14)DNA溶解后，向其中加入RNase至终浓度50～70µg/ml，混匀，37℃水浴30min，除去RNA；

15)加入等体积氯仿/异戊醇，颠倒混合，变性溶液中的蛋白质；

16)12,000～13,000rpm离心10～15min，将上清转移到新管中；

注：在转移上清时，有时候部分DNA会因为含有的多糖杂质过多而比较粘稠(尤其在提愈伤组织的DNA时容易出现这种现象)，为了避免将这部分DNA吸取出来，可以采用以下的方法：

将枪尖伸入Eppendorf管底部，吸尽下层的氯仿/异戊醇，然后12,000～13,000rpm再次离心10min，这样，带有多糖的DNA以及其他的沉淀会被集中到管底，与溶解良好的DNA溶液区分明显，此时再用枪取上层的DNA溶液就比较容易了；

17)加入1/10体积3M NaAc(pH5.2)，混匀后加入2倍体积无水乙醇，颠倒混匀，沉淀DNA，可以在－20℃放置30min～2小时促进DNA沉淀(这一步可以在－20℃中过夜)；

18)12,000～13,000rpm离心10min收集DNA沉淀，弃上清，70％酒精稍作洗涤，尽去70％酒精(也可再离心，然后丢弃上清)，真空浓缩仪抽干，加入适量超纯水溶解备用或不溶解而直接以干的状态置于－20℃保存；

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