DNA测序发展史（3）：三代测序

3.1.Oxford Nanopore公司：[纳米孔测序技术]

蛋白质纳米孔是微型的小孔，其本质是在膜上形成通道。在我们的技术中，蛋白质纳米孔被嵌入合成膜中，并浸入在电生理溶液中，使离子电流通过纳米孔。当像DNA或RNA这样的分子穿过纳米孔时，它们会对电流带来干扰。该信号会被实时分析，用以确定正在通过纳米孔的DNA或RNA链的碱基序列。

英国牛津纳米孔公司新型纳米孔测序法（nanopore sequencing）是将人工合成的一种多聚合物的膜浸在离子溶液中，多聚合物膜上布满了经改造的穿膜孔的跨膜通道蛋白（纳米孔），也就是Reader蛋白，在膜两侧施加不同的电压产生电压差，DNA链在马达蛋白的牵引下，解螺旋通过纳米孔蛋白，不同的碱基会形成特征性离子电流变化信号。该膜具有非常高的电阻。通过对浸在电化学溶液中的膜上施加电势，可以通过纳米孔产生离子电流。进入纳米孔的单分子引起特征性的电流干扰，这被称为Nanopore信号。

关键词记忆纳米孔测序：纳米孔（跨膜通道蛋白）；离子溶液；马达蛋白迁移；单分子，特征性离子电流变化
以下2个视频详细介绍了原理

牛津纳米孔测序（第三代测序）原理

【第三代测序】<中英字幕>oxford nanopore 牛津纳米孔测序原理

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3.2.Pacific Bioscience公司：[单分子实时荧光测序技术SMRT]

Pacific Bioscience公司(太平洋生物公司)：SingleMolecule Real Time(SMRT)测序其通过将脱氧核苷酸用荧光标记，实时地记录荧光的强度变化。当荧光基团被掺入DNA链的时候，它的荧光就同时能在DNA链上探测到。当它与DNA链形成化学键的时候，它的荧光基团就被DNA聚合酶切除，荧光消失。这种荧光标记的脱氧核苷酸不会影响DNA聚合酶的活性，并且在荧光被切除之后，合成的DNA链和天然的DNA链完全一样。测序过程包括文库构建和上机两步。文库构建是将长片段DNA分子与测序接头连接成茎环结构，然后加上与接头互补的测序引物及DNA聚合酶。上机测序是将构建好的文库复合物载入SMRT Cell的纳米孔中，通常一个纳米孔固定一个DNA分子，DNA聚合酶通过共价连接的方式固定在纳米孔底部。

关键词记忆SMRT测序：
SMRT Cell（含有很多ZMWs）；零模波导孔（ ZMW zero-mode waveguides）；荧光标记磷酸基团的核苷酸（方便自动脱落）；DNA聚合酶实时测序；

PacBio-Sequel平台实时(SMRT)测序技术)测序技术原理官网介绍

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