Jackson科普：为基于抗体的研究选择荧光团
前言：
荧光团是科学研究的重要工具。它们广泛用于免疫测定技术，例如流式细胞术、免疫组织化学 (IHC) 和荧光显微镜，其中荧光团偶联的二抗可提供目标分析物的可视化。与比色或化学发光检测相比，荧光检测的主要优势在于它可以实现多路复用。无论您是使用荧光标记的二抗来单独显示单个靶标，还是进行复杂的多色研究，在荧光团选择过程中都需要牢记几个重要因素。
这期的主题是Jackson ImmunoResearch公司为大家讲解：为基于抗体的研究选择荧光团。
一、Jackson：什么是荧光团？
荧光团是吸收特定波长范围内的光（激发）并在另一个更长的波长范围内发射（发射）的分子。激发和发射发生的波长范围称为激发和发射光谱。对于每个荧光团，都有一个最佳波长，在该波长处荧光团被最有效地激发（激发最大值）。同样，对于任何特定的激发最大值，发射光谱具有荧光信号最强的波长（发射最大值）。激发和发射过程是循环的，仅在荧光团受损（光漂白）时结束。这种损坏通常是由于长时间暴露于激发光源造成的。
二、Jackson公司：荧光团如何用于科学研究？
荧光团用于许多研究应用，最常用于免疫测定技术，例如流式细胞术、免疫组织化学 (IHC)、蛋白质印迹、荧光 ELISA (FLISA) 和免疫细胞化学 (ICC)。在这里，荧光团共轭二抗用于结合识别目标分析物的目标特异性一抗。使用标记的多克隆二抗的主要优点是它们提供信号放大，因为多个二抗可以结合每个一抗。标记的二抗还为研究人员在实验设计中提供了高度的灵活性，因为广泛的二抗-荧光团偶联物很容易获得。
三、Jackson公司：有哪些典型的荧光团？
研究人员可以使用许多不同的荧光团，并且随着新染料的开发，选项列表继续增加。Alexa Fluor®、DyLight™ 和 Cy™ 以及最近可用的荧光团如Brilliant Violet™ 染料。此外，荧光蛋白 R-藻红蛋白 (R-PE)、别藻蓝蛋白 (APC) 和 Peridinin-叶绿素蛋白 (PerCP) 也可用于流式细胞术等特定应用。后者受益于J高的亮度和离散的激发和发射光谱。一些较新的荧光团旨在填补现有染料之间的光谱间隙，以便研究人员可以构建更大的多路复用面板。
四、Jackson公司：在荧光团选择过程中哪些特征很重要？
为科学研究选择荧光团时的主要考虑因素是面板设计。由于荧光团标记的二抗主要用于多重实验，因此选择彼此兼容的荧光团以及与检测和分析它们的仪器兼容是至关重要的。
建议使用明亮的荧光团（例如 PE、Alexa Fluor® 488）来检测弱表达的目标，而不太明亮的荧光团（例如 FITC）与更丰富的分析物配对。通过考虑每个荧光团的激发和发射光谱，最大限度地减少光谱重叠并避免背景干扰也很重要。另一个明智的策略是确认当多个荧光团标记的二抗组合时产生的染色与单抗体染色相匹配；这将排除因不同抗体混合在一起而产生的任何交叉反应或阻断效应。理想情况下，在开始多次染色实验之前，应包括使用单个荧光团偶联物的适当控制。
要记住的另一个重要因素是所有荧光团都应妥善储存，远离光线。过期试剂应与较新试剂一起测试，以确保亮度没有受到影响。一些荧光团可能对常见的固定和通透缓冲液敏感，突出了对实验进行仔细优化的必要性。最后，某些荧光团可能与某些细胞类型或结构非特异性结合。尽管可以使用封闭缓冲液来防止这种情况，但重要的是要检查它们是否可以与同一面板中的其他荧光团一起使用。
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