定量分析protein A杂质丨艾美捷Protein A残留检测试剂盒方案

艾美捷Protein A残留检测试剂盒是用来定量分析以抗体纯化介质protein A杂质的试剂盒。

背景资料：

在单克隆抗体药物的纯化过程中，以蛋白A（Protein A）为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法之一，单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。蛋白A 的最初来源是细菌（Staphylococcus aureus）细胞壁中的一个蛋白质，研究表明蛋白A 可能对人体有潜在的危害，它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的释放。由于在蛋白A 亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A 从层析柱上脱落下来，因此用灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A 的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准之一。

蛋白A (Protein A) 酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。首先，用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线，然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。

具体方法为：先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温，蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原－抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高级的复合物，反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物（Streptavidin-HRP Conjugate），静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合，从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质，加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应，待颜色反应一段时间后，终止反应。用酶标仪在450 nm波长下测定其结果，此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。根据蛋白A标准曲线定量分析生物药物中残留蛋白A的含量。

艾美捷Protein A残留检测试剂盒：

Protein A ELISA kit

编号：ADI-900-057

规格：96 Wells（可做37个样本！）

样本类型：含有天然或者重组Protein A的中性缓冲液（无物种限制）

检测方法：比色法，450 nm

组分：Microtiter plate, Conjugate, Antibody, Assay buffer 13, Wash buffer concentrate,Standard, TMB Substrate, Stop solution 2

保存条件：蓝冰运输；收到货后4℃保存（切勿冰冻）

仅用于科研实验.

艾美捷Protein A残留检测技术信息说明：

对来自金黄色葡萄球菌(M)的天然蛋白 A、来自大肠杆菌(R) 的重组蛋白 A、来自大肠杆菌(G)的重组半胱氨酸蛋白 A和重组耐碱蛋白 A的不同蛋白 A 构建体的检测识别对来自大肠杆菌(S) 的变体进行了测试，所得浓度从试剂盒标准曲线中插值并显示在所提供的图中。

图：煮沸后不同蛋白 A 构建体的测定识别。从试剂盒标准曲线内插得到的浓度。通过将观察到的浓度除以预期浓度来计算回收率百分比。A：来自金黄色葡萄球菌(Millipore)的天然蛋白A，n=9；B：来自大肠杆菌(Repligen)的重组蛋白A，n=9；C：来自大肠杆菌(GE)的重组半胱氨酸蛋白A ，n=12；D：来自大肠杆菌的重组抗碱性蛋白 A 变体（来自 GE 的 MabSelet SuRe），n = 12；图形数据代表统计平均值 +/- 1 标准偏差。

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