干货│步步为赢，ChIP实验攻略（中篇）

导读

上一期，给大家介绍了ChIP实验操作中的染色质制备。本期小编就ChIP实验中的免疫沉淀和DNA纯化进行详细的介绍和细节汇总，让您少走弯路，扎扎实实做好ChIP实验。话不多说，干货呈上。

免疫沉淀

得到合适片段大小的染色质后下一步操作就是免疫沉淀实验。免疫沉淀中抗体是非常关键的一个因素。多克隆、单克隆和重组抗体都可以用于ChIP实验，但是不是所有的抗体都适合ChIP实验，优先选择经过ChIP验证过的抗体。

免疫沉淀Tips

➤设置好对照组实验。阴性对照常用抗体同型IgG或标签抗体加入只有标签蛋白载体的样本。

➤抗体选择非常重要，不是所有抗体都适合做ChIP实验，在WB验证中表现很好的抗体，也可能不适用于ChIP。相比较而言，IF和IHC是在固定条件下进行的，可能用于ChIP实验。建议优先考虑那些专门为ChIP验证过的抗体。

➤如果目标蛋白没有商业化抗体，可以定制抗体，之后进行ChIP验证。也可以给目标蛋白加标签，通过标签抗体进行ChIP。如果蛋白质序列在物种间保守性很强，可以尝试跨物种选择抗体。

➤免疫沉淀通常使用蛋白A或G的珠子分离溶液中抗体靶向的蛋白质-染色质复合物。琼脂糖珠价格便宜且高荷载量，但是离心洗剂操作困难且耗时。很多人喜欢使用磁珠，磁珠洗剂非常快速和简单，也可以兼容自动化，同时磁珠可以被吸附到靠近磁场的管子一侧，吸取洗剂缓冲液时避免误吸免疫沉淀样品。

➤IP洗剂溶液的选择也非常重要。选用的Buffer越剧烈，背景DNA去除的越干净，但是目的DNA也会被更多的清洗掉。离子型去污剂（SDS、SDC）比非离子型(NP-40、Tritonx-100)去污剂剧烈。盐离子剧烈程度LiCl > NaCl > KCl。去污剂和盐离子的选择和浓度都会对IP效果产生影响。

➤为降低背景可以在超声之前抽提细胞核，去除胞浆蛋白的干扰。也可以用超声后的染色质与蛋白A/G磁珠预孵育，去除蛋白A/G磁珠在孵育过程中可能产生的非特异性结合。

解交联和DNA纯化

获得蛋白质结合的DNA是ChIP实验的目的。DNA提取之前必须加热解除蛋白质和DNA之间的交联，同时也需要消除RNA和蛋白质。常用的回收方式是柱法回收，硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的DNA，再通过漂洗液去除杂质，最后在低盐、高pH值的环境中将纯的DNA洗脱下来。

解交联和DNA纯化Tips

➤解交联是温度介导的共价键打开的反应，温度越高解交联越快，通常为65℃。

➤解交联过程中可以加入适量的 NaCl，对 DNA 起到保护作用。

➤解交联后的染色质需要消除RNA和蛋白质。

➤吸附柱使用前需要用BL溶液平衡，使用当天处理过的柱子。

➤吸附柱最大体积是800 μL，若样本体积过大，可多次加入。

➤漂洗溶液中乙醇的残留会影响后续的酶反应实验。

ABclonal 相关产品

➤ChIP/ChIP-seq级别抗体

ChIP DNA纯化试剂盒

ABclonal

公司简介

武汉爱博泰克生物科技有限公司（ABclonal Technology Co.,Ltd.）成立于2011年，作为生命科学解决方案的提供商，旨在为更多的科研工作者、IVD企业、新技术开发企业提供抗体、酶、NGS产品和蛋白制品等全套解决方案。

ABclonal现有波士顿抗体与蛋白研发中心、上海诊断与科研分子酶产品研发基地以及中国武汉光谷诊断与科研免疫产品生产和研发基地。经过多年的深耕与发展，ABclonal已拥有免疫与分子酶两大技术平台，集新型分子酶、全领域应用NGS建库解决方案、新平台单克隆抗体与高活性蛋白制品的研发与生产于一体。ABclonal致力成为产业科研转化的核心企业，向生命科学研究工作者和应用企业提供全套可靠的技术解决方案。

干货│步步为赢，ChIP实验攻略（中篇）相关推荐

计算机二级办公室应用题目,干货|计算机二级备考攻略
原标题:干货|计算机二级备考攻略必备物品 1.复习用书 2.一台装有office办公软件的电脑 (考试使用电脑为Windows7系统.) 3.一本笔记本怎么做笔记? 操作题: 基础较好的人,先做一 ...
软件设计师c语言做题技巧,干货!软件设计师备考攻略
原标题:干货!软件设计师备考攻略软件设计师属于软考中级.可能大家会觉得中级呀,听起来有点难,我一点基础也没有,怎么考中级啊. 大家不用慌,听上去好像很有难度,但如果你备考计划准备的好,其实是可以考过 ...
Packet Tracer 5.0建构CCNA实验攻略——帧中继Frame Relay
Packet Tracer 5.0是一款非常不错的Cisco(思科)网络设备模拟器,对于想考思科初级认证(如CCNA)的朋友们来说,Packet Tracer 5.0是非常不错的选择.通常我们周围并没 ...
Packet Tracer 5.0建构CCNA实验攻略(12)——PPP
PPP(Point to Point Protocol)数据链路层协议.两种认证方式:一种是PAP,一种是CHAP.相对来说PAP的认证方式安全性没有CHAP高.PAP在传输password是明文的, ...
Packet Tracer 5.0建构CCNA实验攻略(3)——Cisco VTP
VTP(Vlan Trunk Protocol)即VLAN中继协议.VTP通过网络(ISL帧或cisco私有DTP帧)保持VLAN配置统一性.VTP在系统级管理增加,删除,调整的VLAN,自动地将信息 ...
Packet Tracer 5.0 建构 CCNA 实验攻略——路由器实现 Vlan 间通信
一.网络拓扑结构如下: 二.为六台PC分别配置IP地址.子网掩码和默认网关其余五台PC的配置与上图类似. 三.为路由器0创建g0/0.1逻辑子接口和g0/0.2逻辑子接口,并设置g0/0.1逻辑子 ...
Packet Tracer 5.0 建构 CCNA 实验攻略——配置单区域 OSPF
一.拓扑结构如下: 二.分别为PC0.PC1配置IP地址,子网掩码和默认网关. 三.分别为路由器0.路由器1和路由器2各个接口配置IP地址和子网掩码,并将路由器的开关打开. 注意:可以通过命令show ...
干货收藏 |关键词优化攻略！(附11款关键词检索工具）
关键字搜索是买家查找产品的方式,一个高质量的关键词可以帮助卖家快速增加曝光率.简而言之,利用好关键词机理,能让我们的产品产生更有利的排名因素. 那如何找到合适的关键字,设置关键字时应该注意什么? 今天 ...
Kaggle大牛小姐姐自述：我是怎么成为竞赛中Top 0.3%的 | 干货攻略
原文:Lavanya Shukla 铜灵编译整理量子位出品 | 公众号 QbitAI 天天跟数据打交道的研究人员,都有一个成为Kaggle顶级大师(Grandmaster)的梦想. 但每年的Ka ...

干货│步步为赢，ChIP实验攻略（中篇）

干货│步步为赢，ChIP实验攻略（中篇）相关推荐

最新文章

热门文章