Flipper-TR®活细胞膜张力检测探针解决方案
Flipper-TR探针如何检测荧光寿命变化?
荧光Flipper-TR®探针通过特异性靶向细胞质膜,并通过其荧光寿命变化来反映膜张力变化。Flipper-TR®自发地插入细胞的质膜中,并且仅在插入脂质膜时才会激发荧光。探针通过机械载体上的两个扭曲的二硫噻吩之间的扭转角和J化改变来感知脂质双层膜结构的变化(参见图5)。当处于紧张状态时(二硫噻吩并排),发射寿命更长(4.1-8.0ns),而在松弛状态下(二硫噻吩扭曲),发射寿命短(2-4ns)。方差(cv)约为0.3ns(cv = 4-15%),这允许在分辨率细微变化的情况下进行高分辨率分析,在FLIM成像过程中,可将荧光寿命的差异通过时间来展示,一般来说,较短的寿命为绿色,中等寿命为黄色,较长的寿命为橙色和红色
艾美捷 Flipper-TR的结构和张力检测机制示意图
左边:Flipper-TR的基本分子结构
右边:Flipper-TR低张力时扭曲(绿色)和高张力时并列排布(红色)
这些探针的滤光片组件是什么?
Flipper-TR探针使用长分离滤光片组进行可视化,因为其激发峰值比发射峰值短100 nm以上。因此,理想的滤光片组是488 +/- 20nm的激发波长和575-675 +/- 40nm的发射波长(图3)。时间分辨测量方法允许非常低的背景,它在水性环境中具有低荧光。
艾美捷 Flipper-TR探针在诸如组织培养基或固定缓冲液等水环境中的背景非常低,因为它是完全扭曲的状态,容易形成胶束并自我淬灭(参考文献3)。插入膜后,其扭曲度变小,开始发出高荧光。
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