H3 |组蛋白H3(兔抗体)的3组应用实例
组蛋白3(H3)位于细胞核内,与染色质结合。与H2A、H2B和H4一起存在于核小体中。
名称 |
H3 |组蛋白H3(兔抗体)(核标记) |
Cat# |
AS10-710 |
规格 |
50ul |
应用类型 |
ChIp-qPCR, IF, WB |
保存建议 |
-20°C保存,建议使用前分装以避免反复冻融。为zui大限度的避免损失,在打开管盖之前融化抗体并离心。 |
来源 |
艾美捷 |
一起来看一下下面的3组应用实例:
1.2μg拟南芥染色质富集部分(1)和4周龄拟南芥叶片(2)中的3.75μg总蛋白,在12%SDS-PAGE上分离并在Immobilon-P(微孔,半干)PVDF膜上印迹50分钟。在室温下搅拌转移至MTBS-T(5%牛奶)30分钟后,立即阻断印迹。在室温下搅拌,将印迹在1:5000稀释的一级抗体中培养1小时。倾析抗体溶液,短暂冲洗印迹两次,然后在室温下搅拌在TBS-T中洗涤3次,持续3分钟。在二级抗体(抗IgG辣根过氧化物酶结合物,来自Agrisera,AS09 602)中培养印迹,在室温下搅拌稀释至1:20 000 30分钟。按照上述方法清洗印迹,并按照制造商的说明用ECL检测试剂显影5分钟。曝光时间为30秒。在肽中和试验中,用于诱导H3抗体的肽在染色质富集部分(1)中的双带已被超越。染色质izolation如前所述(Zilberman et al.2008)进行,并进行了少量修改。
用15%SDS-PAGE分离30μg 5µl饱和8M尿素中的衣原体Reinharddi蛋白,并用湿转移系统在100V下印迹1h至0.2µm硝化纤维素。用0.5%冷鱼胶在室温下搅拌,将斑点封闭1h。将印迹在原代抗体(抗H3)中,稀释1:2500,在RT下搅拌1小时。用3X 15min TBS-TT在RT搅拌下清洗斑点。在第二抗体(日光800)1:5000稀释中孵育30min,搅拌30min,用TBSTT冲洗1X 15min,1X与TBST一起清洗15min,然后用ODyssey IRD扫描仪扫描。
根据前面描述的方法进行免疫细胞化学分析(Rybaczek和Maszewski 2006)。将蚕豆根尖部分(1.5mm长)在PBS缓冲液(3.7%多聚甲醛)中固定45 min(18℃),用PBS洗涤数次,置于柠檬酸缓冲消化液(pH 5.0;37℃45分钟),含2.5%果胶酶(Fluka),2.5%纤维素酶(Onozuka R-10;Serva)和2.5%果胶酶(ICN)。去除消化液后,在PBS中清洗根尖3次,用蒸馏水冲洗,并压碎在Super Frost Plus玻片上(Menzel Gläser)。将风干载玻片用PBS缓冲5%BSA在20℃下预处理50分钟,并在加湿空气(4℃)中与针对H3组蛋白(Agrisera)培养的兔抗体一起培养过夜,将其溶解在含有1%BSA的PBS中(以1:50的稀释度)。孵育后,用PBS洗涤载玻片3次,并用Agrisera二级山羊抗兔IgG DyLight®488抗体(AS09 633,1:1000)孵育1h(18℃)。核DNA用4′,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI,0.4μg/ml)染色;西格玛-奥尔德里奇)。在用PBS洗涤后,将载玻片风干并嵌入Vectashield荧光安装介质中(Vector Laboratories)。使用配备有B-2A滤光片(蓝光;λ ≈ 495nm),用于DyLight共轭抗体和UV-2A滤光片(UV光;λ ≈ 365 nm)用于DAPI。所有的图像都是在完全相同的时间用dxm1200ccd相机记录下来的。
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