免疫学课件软件测试,免疫学检测法

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二、免疫学检测法

免疫学检测法的基本原理是细胞因子(或受体)与相应的特异性抗体(单克隆抗体或多克隆抗体)结合，通过同位素、荧光或酶等标记技术加以放大和显示，从而定性或定量显示细胞因子(或受体)的水平。这类方法的优点是实验周期短，少受抑制物或相似生物池功能因子的干扰，如抗体的特异性高可区分不同型或亚型的细胞因子(如IFN)，一次能检测大量标本，易标准化。与生物学活性检测方法相比，免疫学检测法在许多情况下敏感性低于前者，所得结果不表示生物学活性，有的McAb只能识别重组的细胞因子，在检测天然的细胞因子中受到限制。

免疫学检测的方法多采用ELISA和RIA法，可以分为平心法、竞争法和间接法。

(一)ELISA(或RIA)平心法

根据抗体性质和特异性不同可有以下几种不同的平心法ILISA。

1.PcAb与McAb夹心法　用纯化的多克隆抗体(PcAb)包被板子，加待检细胞因子(或可溶性受体)和标准品，上层加酶标记的McAb。有时为了增加敏感性，上层加McAb后再用酶标记第二抗体显色。

2.McAb与PcAb夹心法　用McAb包被板子，加待检样品，上层加酶标记的PcAb。有时为了增加敏感性，上层加PcAb后再用钊对PcAb的酶标记抗抗体。

3.双McAb夹心法选择和应用识别同一个细胞因子(或受体)分子上不同表位的两种McAb，其中一种包被板子，另一种McAb标记酶。由于单克隆抗体亲和力识别表位地匀一，从质量控制角度来看，一般比上两种夹心法易控制。如目前已商品化检测细胞因子(或其受体)的检测盒大多采用双单克隆抗体夹心法。

4.细胞、McAb夹心法用表达IL-2R的MT-1细胞包被板子，加入待检IL-2或标准品，上层加125I标记的McAb，根据γ计数cpm值推算出待检IL-2含量。

(二)竞争法

有报道用况争法检测IL-2水平。用免抗IL-2PcAb包袱板子，同时加入125I标记的IL-2和待测IL-2，根据γ计数cpm值得知待检IL-2对125I-IL-2与PcAb竞争结合的程度，从而推算出待测标本IL-2的含量。这种方法检测IL-2的敏感性可达50pg/ml。

为了增加敏感性，在上述系统中可再连接上生物素，再用链霉亲和素(streptavidin)酶标记物进行放大。此外，还可用化学发光、改进显色底物等措施提高检测方法的敏感性。

表4-23 细胞因子生物学活性与免疫学检测方法的比较　生物学活性法免疫学检测法原理细胞因子特定的细胞因子与相应抗体　生物学活性特异性结合反应结果表示生物学活性水平含　量敏感性一般较高一般较低　 (与细胞表面高亲和力受体有关) (加放大系统可明显升高) 特异性低高 (识别类型、亚型) (不能) (不可能) 周　期较　长短受实验条件影响　　　　培养条件大小　　指示细胞敏感性差异大／　　指示细胞突变可发生／　　生物学作用相同因子干扰大小　　样品中特异性或非特异性大小　抑制物干扰　　　　重复性较　差较　好标准化、大量检测困　难容　易

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