标签蛋白_His标签蛋白镍柱纯化后总有一条杂带怎么办？

小明

His标签蛋白镍柱纯化有杂带怎么办啊

汇研生物——His标签蛋白纯化填料家簇

1.样品本身的的属性，His蛋白容易被体系中的蛋白酶降解时，此时就要在样品中加入蛋白酶抑制剂。避免在纯化过程中His蛋白被降解，呈现出纯化后纯度下降。

2.His蛋白和其它蛋白结合在一起，纯化后也呈现出纯度不够，这时就需要考虑减少蛋白分子之间的作用力，比如加入2% Triton X-100或者加入10-50%的甘油等减少分子间的作用力。

3.理解镍柱纯化蛋白的原理，除带有His标签的蛋白可以可以镍柱结合，镍柱也能和带有半胱氨酸等氨基酸残基的蛋白结合。理解仅靠一步镍柱纯化90%左右纯度是正常的，若需要更高的纯度，则需要继续纯化，比如镍柱洗脱峰在过汇研生物(联系W/Q:514099167,www.huiyan-bio.com)的复合型离子交换层析MMA/MMC Focurose 6HF等。

4.层析体系需要优化，缓冲体系的pH要在7.5-8.3之间，添加200-500mM氯化钠减少非特异性吸附，上样完后要彻底清洗，保证填料孔内，颗粒间未结合的蛋白全部洗出后，在开始洗脱，保证上完样后，清洗在10CV以上。洗脱过程需要摸索咪唑的强度梯度，用连续咪唑梯度来摸索洗脱浓度。

5.层析柱装填的疏密不合适，层析柱的分配器分配的不均匀。这种情况在工业生产中影响也很大，会影响其纯度等。

6.层析填料上端，和柱头分配器间的体积太大，大中大型层析柱使用过程中，液距控制在0.5cm以内，避免影响整个层析过程。

小明

该如何选择合适的镍柱啊?

IDA/IMAC/NTA/excel/TED镍柱该如何选择

汇研生物——His标签蛋白纯化填料家簇

请参考《详述His标签蛋白的纯化》点击括号里面字体即可查看。

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