多组学-ATAC-seq-概念
- ATAC-seq:（
AssayforTransposase-AccessibleChromatinwith high throughputsequencing）是美国Stanford大学William Greenleaf教授2013年研发的全新方法，利用DNA转座酶结合高通量测序技术，研究染色体的可进入性。它是一种创新的表观遗传学技术，通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割，进而获得在该特定时空下基因组中所有活跃转录的调控序列。 - 染色体包装水平：核小体核心颗粒(nucleosome core particle)、染色小体(chromatosome)、 30 nm水平染色质纤丝(30 nm fibre)和高于30 nm水平的染色体包装。
- DNA的复制，基因的转录，需要将DNA的高级结构解开，这部分打开的染色质称为
开放染色质（open chromatin），而打开的染色质，就允许一些调控蛋白（比如转录因子和辅因子）与之结合。染色质的这种特性，叫做染色质的可及性（chromatin accessibility）。 - DNA转座，是一种把
DNA序列从染色体的一个区域搬运到另外一个区域的现象，由DNA转座酶来实现。这种转座插入DNA，需要插入位点的染色质是开放的，否则就会被高级结构卡住。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物（即带着测序标签的转座酶），加入到细胞核，再利用已知序列的标签进行建库后测序，就知道哪些区域是开放染色质了，这也就是ATAC-seq的原理。
- 技术：制备细胞悬液->裂解细胞膜，获取细胞核->采用Tn5进行酶切->回收DNA片段，PCR扩增建库->高通量测序->生信分析
- ATAC-seq与ChIP联合分析
研究课题为人小细胞肺癌促进癌症扩散转移的背景机制。主要比较原发性和肝转移性的小细胞肺癌细胞之间的差异。利用ATAC-seq，发现NFI家族转录因子富集在具有差异的染色质开放位点中，预示着NFI家族转录因子在调控肿瘤细胞转移中扮演着重要角色。在染色质高开放性位点区域伴随着Nfib拷贝数量增多，且Nfib在侵袭性原发性肿瘤和转移性肿瘤内高表达，Nfib表现出维持染色质及远端调控区域开放和促进神经基因表达的功能，说明了Nfib对促进癌细胞增殖和迁移具有重要的作用。 - motif分析转录因子结合蛋白。对处于发育过程中的黑腹果蝇眼睛及其通过遗传诱导的肿瘤模型，利用ATAC-seq技术分析染色质开放区域已在活体中发现驱动肿瘤发育的转录因子及调控区域。然后对找到的染色质活性开放区域进行转录因子预测分析，发现了两个关键的转录因子，猜测它们可能与染色质图谱的变化有关。通过对候选的一个转录因子进行功能验证和靶标分析，发现其为肿瘤转录组中的一个关键的转录调控因子。
- ATAC-seq结果和传统方法结果有很强的一致性，同时也和基于组蛋白修饰marker的ChIP-seq有较高的吻合度。ATAC-seq中的peak，往往是启动子、增强子序列，以及一些反式调控因子结合的位点（启动子是靠近转录起始点(TSS)的DNA区域。它包含转录因子的结合位点，这些转录因子将招募RNA聚合酶。增强子是可位于启动子下游或上游1Mb的DNA区域。当转录因子与增强子结合，并与启动子区域接触时，该基因的转录增加。相反，抑制子会减少或抑制基因的表达。）。ATAC-seq的重复性，比MNase-seq和DNase-seq的更强，操作起来也更简单，而且只需要很少的细胞/组织量，同时信号更漂亮。是研究染色质开放性首选的技术方法。
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